ตอบ:
ดูด้านล่าง
คำอธิบาย:
PCR ทำงานได้จาก DNA แม่แบบ ให้บอกว่าคุณกำลังตรวจหา HIV (HIV เป็นไวรัส RNA แต่เมื่อเข้าไปในเซลล์มันจะกลายเป็น DNA …. ดังนั้นจะมี DNA HIV ในเซลล์ที่ติดเชื้อ) ไพรเมอร์ที่คุณใช้จะสร้างผลิตภัณฑ์ (แอมพิคอน) ที่สอดคล้องกับส่วนหนึ่งของ DNA เอชไอวี หากคุณเห็นเครื่องขยายเสียงนี้แสดงว่าคุณมีลำดับเอชไอวีอยู่ ….. แต่ถ้าคุณไม่มีการควบคุมเชิงลบคุณอาจมีการปนเปื้อน
PCR นั้นมีความสำคัญอย่างยิ่ง มีวิธีแก้ปัญหาหลายอย่างที่ใช้ใน PCR (น้ำ, บัฟเฟอร์, dNTPs, เอนไซม์) … และทั้งหมดนั้นสามารถปนเปื้อนด้วย DNA จากตัวอย่างอื่น ๆ ได้อย่างง่ายดายหรือแม้แต่จากเครื่องขยายเสียงที่ทำปฏิกิริยาที่คุณทำเมื่อวานนี้ ดังนั้นหากคุณมีตัวอย่าง DNA ของผู้ป่วย X และคุณกำลังตรวจหาเชื้อ HIV โดย PCR ไพรเมอร์ PCR อาจทำให้ผลิตภัณฑ์ออกจาก DNA ของ HIV ในตัวอย่าง DNA ของผู้ป่วย X (ถ้าบุคคลนั้นมีเชื้อเอชไอวี) หรืออาจทำให้หลุดออกมา การปนเปื้อน. แต่คุณไม่สามารถบอกได้ว่ามันมาจากการปนเปื้อนหรือจาก HIV ใน DNA ของผู้ป่วย
ดังนั้นคุณต้องควบคุมน้ำ Tube 1 คุณวางองค์ประกอบทั้งหมดของปฏิกิริยาและสำหรับ DNA คุณเติมน้ำเท่านั้น นี่คือการควบคุมเชิงลบ ไม่มีอะไรควรขยายที่นี่ ใน Tube 2 คุณใส่ส่วนประกอบปฏิกิริยาทั้งหมดและ DNA ของผู้ป่วย X หากคุณได้รับผลิตภัณฑ์ที่นี่ (และไม่มีอะไรใน Tube 1), ผู้ป่วย X อาจมี DNA HIV ใน DNA ของเขา / เธอ หากคุณได้รับผลิตภัณฑ์ทั้งใน Tube 1 และ Tube 2 คุณมีปัญหาการปนเปื้อนและคุณไม่สามารถบอกได้ว่า HIV ในตัวอย่างของผู้ป่วยมาจากโรคหรือจากการปนเปื้อน
ดังนั้นคุณจะต้องควบคุมน้ำเสมอ (น้ำแทน DNA)
PCR มีข้อ จำกัด อะไรบ้าง?
PCR เป็นเทคนิคที่ใช้ในอณูชีววิทยาเพื่อขยายสำเนาเดี่ยว / สำเนาไม่กี่ส่วนของดีเอ็นเอสร้างสำเนาหลายพันล้านชุดลำดับดีเอ็นเอโดยเฉพาะ ข้อเสียเปรียบหลักประการหนึ่งของ PCR คือข้อมูลก่อนหน้านี้เกี่ยวกับลำดับเป้าหมายนั้นมีความจำเป็นเพื่อสร้างไพรเมอร์ที่จะช่วยให้การขยายสัญญาณแบบเลือกได้ เช่นเดียวกับเอนไซม์ทั้งหมด DNA polymerase ก็มีแนวโน้มที่จะเกิดข้อผิดพลาดเช่นกันซึ่งทำให้เกิดการกลายพันธุ์ในชิ้นส่วน PCR ที่ถูกสร้างขึ้น
องค์ประกอบใดบ้างที่จำเป็นในการขยาย DNA ของคุณใน PCR
ตัวอย่างดีเอ็นเอ DNA polymerase primers ไปข้างหน้าไพรเมอร์ย้อนกลับ MgCl2 นิวคลีโอไทด์บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา
PCR อนุญาตให้คุณทำอะไรกับ DNA
การขยาย PCR ย่อมาจากปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสและเป็นเทคนิคที่ใช้ในการทำสำเนา framgent เดียวของดีเอ็นเอ (ขยาย) จำนวนมาก ภาพด้านล่างแสดงเทคนิค คุณเริ่มต้นด้วยส่วนของ DNA ผสมกับ: polymerases: เอนไซม์ที่จะคัดลอกนิวคลีโอไทด์ DNA: โครงสร้างของ DNA Primer DNA: ชิ้นส่วนของ DNA เพื่อส่งสัญญาณของเอนไซม์ที่จะเริ่มต้นการจำลองแบบจากนั้นคุณไปหลายรอบของ: denaturation: โดยการให้ความร้อนทำให้ DNA คู่ที่มีเกลียวคู่นั้น 'แยก' ออกจากกัน -> เส้นเดี่ยวสำหรับการหลอมแบบจำลอง: ลดอุณหภูมิเพื่อให้ไพรเมอร์ติดกับ DNA เส้นเดียว -> สัญญาณเริ่มต้นสำหรับการยืดตัวแบบจำลอง: เพิ่มอุณหภูมิ โพลิเมอร์เพื่อเริ่มการทำงานของพวกเขา -> DNA ที่ถูกคัด