ทำไม GAPDH ถึงใช้ใน Western Blot + ตัวอย่าง

ทำไม GAPDH ถึงใช้ใน Western Blot + ตัวอย่าง
Anonim

ตอบ:

GAPDH มักใช้เป็นตัวควบคุมการโหลด

คำอธิบาย:

ในการซับแบบตะวันตกเรามักใช้ GAPDH เป็นตัวควบคุมการโหลด สิ่งนี้หมายความว่าโดยละเอียดสำหรับ GAPDH เราสามารถตรวจสอบว่าเรามีปริมาณโปรตีนที่เทียบเท่าในช่องทางต่าง ๆ ของ blot

ตัวอย่างของการใช้งาน - บอกว่าเรามีโรคที่เราคิดว่าทำให้โปรตีนในเซลล์สูงขึ้น เราจะสร้างตัวอย่างจากเซลล์ "สุขภาพดี" และอีกตัวอย่างจากเซลล์ "โรค" จากนั้นเราจะโหลดปริมาณโปรตีนที่เท่ากันของตัวอย่างทั้งสองลงบนเจลสำหรับหยดดวงอาทิตย์

หลังจากการตรวจสอบปริมาณโปรตีนที่เราสนใจเราพบว่าในเซลล์ที่เป็นโรคนั้นระดับโปรตีนนั้นสูงขึ้นจริง ๆ (นั่นคือแถบสีเข้มจะถูกสร้างขึ้นบน blot) เพื่อพิสูจน์ว่าการเพิ่มขึ้นของโปรตีนนี้เกิดจากการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกในเซลล์แทนที่จะเป็นสิ่งประดิษฐ์ที่บรรจุ (นั่นคือยิ่งวงอินสติคชันเกิดจากการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของโปรตีนในเซลล์และไม่ใช่โดยที่เราตั้งใจโหลดมากขึ้น ของตัวอย่าง "โรค" ที่ดีกว่า "สุขภาพ") เราก็จะทำการตรวจสอบปริมาณของ GAPDH เพื่อแสดงให้เห็นว่าระดับโปรตีนทั้งหมดนั้นเหมือนกันในเลนทั้งสอง

ด้วยการทำเช่นนี้เราจะแสดงให้เห็นว่ามีการโหลดโปรตีนที่เทียบเท่าในสองเลนและการเปลี่ยนแปลงของความเข้มของแถบที่เราสังเกตเห็นนั้นเกิดจากการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของโปรตีนสำหรับโปรตีนที่น่าสนใจ