ตอบ:
GAPDH มักใช้เป็นตัวควบคุมการโหลด
คำอธิบาย:
ในการซับแบบตะวันตกเรามักใช้ GAPDH เป็นตัวควบคุมการโหลด สิ่งนี้หมายความว่าโดยละเอียดสำหรับ GAPDH เราสามารถตรวจสอบว่าเรามีปริมาณโปรตีนที่เทียบเท่าในช่องทางต่าง ๆ ของ blot
ตัวอย่างของการใช้งาน - บอกว่าเรามีโรคที่เราคิดว่าทำให้โปรตีนในเซลล์สูงขึ้น เราจะสร้างตัวอย่างจากเซลล์ "สุขภาพดี" และอีกตัวอย่างจากเซลล์ "โรค" จากนั้นเราจะโหลดปริมาณโปรตีนที่เท่ากันของตัวอย่างทั้งสองลงบนเจลสำหรับหยดดวงอาทิตย์
หลังจากการตรวจสอบปริมาณโปรตีนที่เราสนใจเราพบว่าในเซลล์ที่เป็นโรคนั้นระดับโปรตีนนั้นสูงขึ้นจริง ๆ (นั่นคือแถบสีเข้มจะถูกสร้างขึ้นบน blot) เพื่อพิสูจน์ว่าการเพิ่มขึ้นของโปรตีนนี้เกิดจากการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกในเซลล์แทนที่จะเป็นสิ่งประดิษฐ์ที่บรรจุ (นั่นคือยิ่งวงอินสติคชันเกิดจากการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของโปรตีนในเซลล์และไม่ใช่โดยที่เราตั้งใจโหลดมากขึ้น ของตัวอย่าง "โรค" ที่ดีกว่า "สุขภาพ") เราก็จะทำการตรวจสอบปริมาณของ GAPDH เพื่อแสดงให้เห็นว่าระดับโปรตีนทั้งหมดนั้นเหมือนกันในเลนทั้งสอง
ด้วยการทำเช่นนี้เราจะแสดงให้เห็นว่ามีการโหลดโปรตีนที่เทียบเท่าในสองเลนและการเปลี่ยนแปลงของความเข้มของแถบที่เราสังเกตเห็นนั้นเกิดจากการเปลี่ยนแปลงของการแสดงออกของโปรตีนสำหรับโปรตีนที่น่าสนใจ
เวลาไม่ต่อเนื่องหรือต่อเนื่อง? ทำไม? + ตัวอย่าง
ข้อมูลที่ไม่ต่อเนื่องโดยทั่วไปคือคำตอบทั้งจำนวน ชอบต้นไม้หรือโต๊ะหรือคนกี่คน ขนาดของรองเท้าก็ไม่ต่อเนื่องเช่นกัน แต่น้ำหนักส่วนสูงและเวลาเป็นตัวอย่างของข้อมูลต่อเนื่อง วิธีหนึ่งในการตัดสินใจว่าคุณใช้เวลาสองครั้งเช่น 9 วินาทีและ 10 วินาทีคุณมีเวลาระหว่างสองสิ่งนี้หรือไม่? ใช่บันทึกเวลาโลกของ Bolt ใช้เวลา 9.58 วินาทีถ้าคุณใช้ 9 โต๊ะและ 10 โต๊ะคุณสามารถมีโต๊ะทำงานกี่อันในระหว่างนี้หรือไม่? ไม่มีโต๊ะ 9 1/2 โต๊ะคือโต๊ะ 9 โต๊ะและโต๊ะหัก!
ทำไม "C" l ^ - ฐานของ Lewis? + ตัวอย่าง
"C" l ^ - เป็นฐานของ Lewis เพราะมันบริจาคคู่อิเล็กตรอนที่ไม่มีเงื่อนไข ตัวอย่างนี้คือ "Co" ("NH" _3) _4 ("C" l) _2 ^ (2+) มันเป็นไอออนที่ซับซ้อนคลอรีนได้บริจาคคู่อิเล็กตรอนให้กับโคบอลต์
เหตุใด Western blot จึงถูกใช้เพื่อยืนยัน Elisa + ตัวอย่าง
โดยทั่วไปแล้วนี่คือการทดสอบแอนติบอดีจำเพาะ ใน ELISA เป็นเรื่องยากมากที่จะบอกว่าแอนติบอดีของคุณจับกับโปรตีนที่คุณสนใจโปรตีนที่แตกต่างอย่างสิ้นเชิงหรือโปรตีนหลากหลายชนิด Western blot จะถูกใช้เพื่อตรวจสอบความจำเพาะของแอนติบอดี (คุณควรทราบว่า Western blot อาจไม่ตรวจจับปฏิกิริยาข้ามทั้งหมดกับโปรตีนที่ไม่ถูกต้อง) ใน Western blot คุณสามารถดูขนาดของโปรตีนที่แอนติบอดีจับ (คุณไม่สามารถอยู่ใน ELISA) ตัวอย่างเช่นถ้าแอนติบอดีของคุณควรจับกับโปรตีน 56 kDa และคุณเห็นแถบที่ ~ 56 kDa บนจุดนั้นคุณจะมั่นใจได้อย่างสมเหตุสมผลว่าแอนติบอดีนั้นจะจับกับโปรตีนที่ถูกต้อง ในทางตรงกันข้ามถ้าคุณเห็นวงดนตรีที่ 32 kDa คุณสามารถสรุปได้ว่าแอนติบอดีนั้นจับกั