การแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโทกราฟีคืออะไร? + ตัวอย่าง

การแลกเปลี่ยนไอออนโครมาโทกราฟีคืออะไร? + ตัวอย่าง
Anonim

ตอบ:

มันเป็นกระบวนการในการแยกโปรตีนที่แตกต่างกันขึ้นอยู่กับประจุและคุณสมบัติการเกาะติดกับวัสดุ

คำอธิบาย:

ที่ pH ต่างกันโปรตีนต่าง ๆ มีประจุแตกต่างกัน ด้วยการวางส่วนผสมของโปรตีนที่ค่า pH ที่กำหนดไว้คุณสามารถมีส่วนผสมที่มีโปรตีนที่มีคุณสมบัติประจุแตกต่างกัน

หากส่วนผสมของโปรตีนนี้ถูกเทลงบนคอลัมน์ที่มีวัสดุที่มีประจุอยู่ในนั้นคอลัมน์นั้นก็จะจับโปรตีนไว้ภายในประจุที่ตรงกันข้าม

จากนั้นคุณสามารถใช้วิธีการแก้ปัญหาที่แตกต่างกันที่มีปริมาณไอออนแตกต่างกันเพื่อกำจัด (ปลด) โปรตีนจากคอลัมน์

ตัวอย่างเช่นสมมติว่าคุณมีส่วนผสมของโปรตีนที่คุณต้องการชำระโปรตีนให้บริสุทธิ์ หากคุณรู้ว่ามีค่าความเป็นกรดเป็นด่างโดยเฉพาะโปรตีนที่น่าสนใจของคุณจะมีประจุบวกคุณสามารถเทส่วนผสมลงในคอลัมน์ที่มีวัสดุที่มีประจุลบ

โปรตีนทั้งหมดที่ไม่ได้มีประจุหรือเมื่อประจุลบจะไหลผ่านคอลัมน์ จากนั้นคุณสามารถปล่อยโปรตีนที่มีประจุบวกของคุณโดยการทำให้คอลัมน์มีประจุเป็นบวกซึ่งจะทำให้ประจุลบในคอลัมน์นั้นสมบูรณ์ การแข่งขันครั้งนี้จะทำให้โปรตีนที่คุณสนใจถูกชะล้างออกไป

นี่คือตัวอย่างของเหตุการณ์นี้

แต่ละถาดประกอบด้วยบัฟเฟอร์ที่ความเข้มข้นที่แตกต่างกันและสามารถเห็นได้ในตัวอย่าง 175 mM (มุมซ้ายบน) โปรตีนแดง / น้ำตาลน้อยมากที่จับกับเมมเบรนที่มีประจุเนื่องจากมีการแข่งขันระหว่างไอออนในบัฟเฟอร์และ โปรตีนสำหรับไซต์ที่มีประจุรวมบนเมมเบรน (ไอออนในบัฟเฟอร์มี "ชนะ" เพราะมีจำนวนมากและมีการป้องกันโปรตีนจากการจับ) ในตัวอย่างที่ด้านล่างขวาโปรตีนจำนวนมากได้ผูกกับเมมเบรนเนื่องจากมีไอออนน้อยกว่าในการแข่งขันสำหรับเว็บไซต์ที่มีผลผูกพัน

ในวิดีโอนี้คุณสามารถดู chromatography แลกเปลี่ยนประจุลบในการทำงาน: