เหตุใด DNase และ lysozyme จึงใช้ในขั้นตอน lysis ระหว่างการทำให้บริสุทธิ์โปรตีน?

เหตุใด DNase และ lysozyme จึงใช้ในขั้นตอน lysis ระหว่างการทำให้บริสุทธิ์โปรตีน?
Anonim

ตอบ:

เพื่อชำระเศษส่วนโปรตีน …

คำอธิบาย:

หากคุณบริสุทธิ์โปรตีน (มักจะเฉพาะเจาะจง) คุณจะต้องกำจัดขยะให้มากที่สุดเท่าที่จะทำได้

มันขึ้นอยู่กับขอบเขตโปรตีนที่คุณเป็น แต่โดยทั่วไปแล้วมันเป็นความคิดที่ดีโดยเฉพาะใน เตรียม การทำให้บริสุทธิ์เพื่อกำจัดสิ่งสกปรกให้ได้มากที่สุด

1:

เนื่องจากโปรตีนโดยทั่วไปมีขนาดใหญ่และดังนั้นจะปรากฏในแถบส่วนล่างของเศษส่วน (ultracentrifuged) ของคุณคุณต้องการกำจัดกรดนิวคลีอดใด ๆ โดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าโปรตีนที่คุณกำลังโกรธนั้นเกี่ยวข้องกับสิ่งที่ชอบ Pol1, Reverse Transcriptase หรือเอนไซม์อื่น ๆ ที่เกี่ยวข้องกับการจำลองแบบ / การถอดความ / การแปล..

คุณสามารถแยกกรดนิวคลีอิกที่มีอยู่ในตัวอย่างโดยใช้ DNAse: สิ่งนี้จะไฮโดรไลส์ DNA ทั้งหมดในส่วนที่เป็นส่วนประกอบ

ในใจคุณมี DNAse หลากหลายชนิดซึ่งแตกต่างกันไปในกลไกและความจำเพาะสำหรับสารตั้งต้น ขึ้นอยู่กับ DNAse ที่ใช้มันสามารถแสดงได้เช่นกัน Endo- หรือ Exo- กิจกรรม nuclease …

มากไปกว่านั้น RNase มีความเหมาะสมมากกว่าเนื่องจาก RNA มักอยู่ในช่วงการลอยตัว / ส่วนของโปรตีนและสามารถจับกับโปรตีนได้

2:

ไลโซไซม์: เอนไซม์ที่มีฟังก์ชันอย่างน้อยสองฟังก์ชัน:

มันเป็นเอนไซม์ deglycosylates: โปรตีนส่วนใหญ่ในกระแสเลือดนั้นเป็น Glycosylated: พวกมันมีโมเลกุลน้ำตาลอยู่สองสามตัว ไลโซไซม์จะกำจัดน้ำตาลที่ตกค้าง

นอกจากนี้ยังมีความสามารถในการทำลายผนังเซลล์ของแบคทีเรียแกรมบวกทำให้พวกมัน Lyse. (ถ้าคุณต้องการชำระโปรตีนจากแบคทีเรียแกรมบวก)

ผลิตภัณฑ์ที่เสื่อมโทรมไม่ว่าจะเป็นกรดนิวคลีอิกหรือเศษน้ำตาลจะปรากฏที่เศษส่วนด้านบนของ Centrifuge Tube เนื่องจากการลอยตัว "เบา" …